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徠卡冰凍切片機的使用方法

更新時間:2025-04-30   點擊次數(shù):4566次
  半薄的部分,可從cryoprotected生物材料的冷凍塊切片在-90°C。徠卡冰凍切片機的使用這些路段的優(yōu)點是subcellullar形態(tài)保存和改進的光學分辨率。化學固定的生物材料是cryoprotected浸泡在2.3米,蔗糖和浸泡在液氮中冷凍到標本引腳。切片是執(zhí)行與調整,切較厚部分(0.3至1μm)的ultramicrotome的厚度控制在低溫-ultramicrotome。一旦已取得的部分,他們是從使用蔗糖液滴的刀,但它們置于玻片上,而不是放在標本電網。
 
  玻片上應注明對其中的部分將被放置標記的玻璃,洗,然后外套的玻璃面的鉆石鉛筆。用洗滌劑和水清洗后,他們可能會涂要么明膠,聚-L-賴氨酸或阿爾辛藍。對于這些*,下降1%明膠被涂污在玻璃上使用的是第二張幻燈片和風干的幻燈片。對于其他兩種方法,見下文。涂層的幻燈片,可確保部分粘在標簽過程的幻燈片。
 

 

  免疫標記的玻片上的冰凍切片。
 
  浸入幻燈片,與部分,成Coplin含有PBS JAR。這將洗去蔗糖。
 
  浸入到用含50毫米氯化銨在為了解渴自由醛基的幻燈片。
 
  浸入到PBS的幻燈片,包含阻斷劑(如1%明膠)。刪除的幻燈片,幻燈片等的部分和他們周圍的區(qū)域保持濕干表面。重要的是,部分沒有干出來的。
 
  把加入10μl-20μL稀釋,離心抗體的上部分,在潮濕的氣氛中離開15分鐘到24小時。
 
  抗體洗凈,用新鮮的PBS(一個Coplin JAR)。
 
  重復抗體孵育和洗滌步驟與二級fluoresceinated抗體(步驟4和5)。
 
  安裝在90%甘油的PBS的幻燈片,或沖洗水和含Moviol或Permount防褪色的化合物掛載。這將產生一個*性的裝載熒光信號是不容易漂白,當暴露在紫外線下。
 
  徠卡冰凍切片機與自體熒光的問題
 
  如果所研究的材料是用戊二醛固定,然后自體熒光將出席。這可以由0.1%的PBS(pH值8)治療的部分被刪除。硼庫存解決方案,可以無限期地儲存在pH值12。在pH 7分子的半衰期為10秒。在pH 8的半衰期為100秒。
 
  如果從組織的自體熒光,然后金或酶標記的抗體可以取代二次熒光抗體。在這樣的抗體結合可以可視化使用銀增強揭示的黃金,或產生酶細胞化學在組織切片的彩色反應產物。
 
  聚-L-賴氨酸涂層玻片
 
  在100毫升蒸餾水溶解聚-L-賴氨酸10毫克。
 
  保留干凈,標志著幻燈片,在這30分鐘的解決方案。
 
  無論是空氣干燥,不洗或沖洗蒸餾水簡要。
 
  阿爾辛藍玻片上的涂層。
 
  0.5%阿爾辛藍原液
 
  這個解決方案1:100用蒸餾水稀釋
 
  在稀溶液中10分鐘,浸干凈,顯著的幻燈片。
 
  簡要蒸餾水沖洗幻燈片。這洗之后,他們將繼續(xù)略帶藍色。
 
  晾干后方可使用,并且只使用新鮮配制的幻燈片。
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