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技術(shù)交流:熒光顯微鏡激發(fā)光譜波段值

更新時(shí)間:2011-12-02   點(diǎn)擊次數(shù):6854次

熒光顯微鏡濾色片

熒光顯微鏡用濾色片(色玻璃和干涉濾色片) 選取光源中的部分光譜段以獲得熒光物質(zhì)的激發(fā)光以及發(fā)揮相應(yīng)的截止作用從原理上講是*可以的, 但不可能配備那么多濾色片去適應(yīng)所有的熒光物質(zhì)的需要。如何建立zui小的濾色片系列, 組合后使之滿足各種不同的要求, 這是設(shè)計(jì)者必須要認(rèn)真權(quán)衡的問題。除了功能考慮外, 還要注意成本和濾色片壽命。色玻璃和干涉濾色片價(jià)位比, 目前相差百倍, 一些軟膜干涉濾色片的壽命僅兩年有效。因此設(shè)計(jì)者必須關(guān)注“用戶”需要, 經(jīng)常使用那些熒光色素, 對于特殊要求的可作為選用件特殊處理。

對于激發(fā)濾色片一般按激發(fā)光譜分為: 紫外區(qū)(UV ) 波段在340nm~ 380nm , 小于400nm; 紫ö藍(lán)區(qū)(V ) 波段在390nm~ 460nm; 藍(lán)光區(qū)(B) 波段在460nm~ 500nm; 綠光區(qū)(G) 波段在500nm~ 570nm , 目前還有黃光區(qū)(Y) 波段在570nm~ 595nm 之間, 各廠家在各激發(fā)區(qū)內(nèi)還進(jìn)行細(xì)分。細(xì)分的原則是按不同的激發(fā)波帶寬度和峰值, 如在B 激發(fā)中分為400nm~ 490nm; 420nm~ 490nm; 450nm~ 490nm; 465nm~ 495nm和470nm~ 490nm 5 種。

截止濾色片要阻擋非熒光在象面上出現(xiàn), 來自被檢物體的雜散光和反射光一旦進(jìn)入觀察系統(tǒng)后會(huì)使襯度降低, 因?yàn)樗葻晒饩哂懈叩牧炼?。對于截止濾色片的要求是它的光譜特性和它是否產(chǎn)生自發(fā)熒光。

設(shè)計(jì)截止濾色片的光譜特性時(shí), 除了要考慮熒光的發(fā)射光譜外, 還需注意到激發(fā)光譜往往與發(fā)射光譜有一重疊區(qū)的處理。由于熒光大都在400nm~ 660nm 區(qū)域內(nèi), 若用長波通濾色片, 起始透射譜線為400nm , 每隔10nm~ 30nm 增加, 一般配備10 片即可滿足了。

熒光顯微鏡還常需用隔熱玻璃如(XRB1~ 3) 和色溫濾色片(牌號為SSB10~ 200) 調(diào)節(jié)色溫以適應(yīng)攝影要求。

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